Universal-логотип

Universal Sequencing TELL-Seq китепканасы

Universal-Sequencing-TELL-Seq-Library-продукт

Техникалык шарттар

  • Продукт аты: TELL-SeqTM Library Sequencing Kit
  • Өндүрүүчү: Universal Sequencing Technology Corporation
  • Шайкештик: iSeq 100дөн башка бардык Illumina секвенирлөө системалары
  • Колдонуу максаты: Диагностикалык процедуралар үчүн эмес, изилдөө үчүн гана колдонуу
  • Кайра карап чыгуу тарыхы: 7.0 версиясы, 2024-жылдын августу

Продукт колдонуу нускамалары:

Introduction
TELL-SeqTM китепканасы кандайдыр бир Illumina секвенирлөө тутумдары үчүн ыңгайлаштырылган секвенирлөө праймерлерин талап кылат жана байланышкан окуулар үчүн молекулярдык штрих-код катары колдонулган 18-базалык индекс 1 ырааттуулугун камтыйт, ал толугу менен ырааттуу болушу керек.

Комплекттин мазмуну

Компоненттин аталышы Капкактын түсү Концентрация Көлөмү (µL)
1 Primer окуу CAP Black 100M 50
2 Primer окуу CAP White 100M 50
Индекс 1 Primer CAP Red 100M 50
Индекс 2 Primer CAP Yellow 100M 50

TELL-SeqTM китепканасынын структурасы жана секвенирлөө схемасы

  • Индекс 1 (I7 индекси) 18 базалык TELL Bead ырааттуулугун камтыйт, алар толугу менен тизилиши керек.
  • Индекс 2 (I5 индекси) s камтыйтampкитепканада колдонулган le index праймер ырааттуулугу ampжашоо.
  • Жупташкан аягы секвенирлөө эң аз окуу узундугу 2×96 жана максималдуу окуу узундугу 2×150 талап кылынат.
  • Китепканада ар кандай мультиплекстик праймерлер колдонулганда, китепканалар секвенирлөө үчүн бириктирилиши мүмкүн ampлификация кадамы.

Ыңгайлаштырылган секвенирлөө праймерлери
Ыңгайлаштырылган секвенирлөөчү праймерлер TELL-SeqTM китепканаларын ырааттуулук үчүн талап кылынат жана TELL-SeqTM Illumina Sequencing Primer топтомунда берилет.

Custom Index 2 Primer
Ыңгайлаштырылган Index 2 праймери ар кандай мультиплекстик праймерлери бар бир нече TELL-SeqTM китепканалары секвенирлөө үчүн бириктирилгенде жана секвенсер i5 индексинин секвенирлөө праймерин талап кылганда керектелет. Учурда, бир гана MiSeq үчүн, ыңгайлаштырылган Index 2 Primer талап кылынбайт.

Көп берилүүчү суроолор (FAQ)

  • С: TELL-SeqTM комплекти диагностикалык процедуралар үчүн колдонулушу мүмкүнбү?
    Ж: Жок, TELL-SeqTM комплекти изилдөө үчүн гана колдонулат жана диагностикалык процедуралар үчүн колдонулбашы керек.
  • С: Жупташтырылган секвенирлөө үчүн минималдуу жана максималдуу окуу узундугу кандай?
    A: Окуу узундугунун минималдуу талабы 2×96 жана максималдуу окуу узундугу талап жупташкан аягы секвенирлөө үчүн 2×150.

TELL-Seq™ Library Sequencing User Guide
iSeq 100дөн башка бардык Illumina@ секвенирлөө системалары үчүн

Изилдөө үчүн гана. Диагностикалык процедураларда колдонуу үчүн эмес.
Документ № 100018 v7.0
2024-жылдын августу

Бул документ Universal Sequencing Technology корпорациясынын менчиги болуп саналат жана бул жерде сүрөттөлгөн өнүмдөрдү колдонууга байланыштуу өзүнүн кардарынын пайдалануусу үчүн жана башка максаттар үчүн гана арналган.
TELL-Seq™ комплектинин туура жана коопсуз колдонулушун камсыз кылуу үчүн бул документтеги көрсөтмөлөрдү туура үйрөтүлгөн персонал так аткарышы керек.
УНИВЕРСАЛДЫК ТАРТУУЛОО ТЕХНОЛОГИЯСЫ TELL-SEQ™ КИТИН ТУУРА КОЛДОНУУДАН КИЙИН КЕЛГЕН ЭЧ КАНДАЙ ЖООПКЕРЧИЛИКТИ АЛБАЙТ.
©2022 Universal Sequencing Technology Corporation. Бардык укуктар корголгон.
TELL-Seq™ – Universal Sequencing Technology корпорациясынын соода белгиси. Бардык башка аталыштар, логотиптер жана башка соода белгилери алардын ээлеринин менчиги болуп саналат.

Кайра карап чыгуу тарыхы

Документ № Версия DCR маалымдамасы жана комментарийи
C01K002 Rev. A январь 2020 Баштапкы релиз
C01K002 Rev. B Март 2020 Тиркемени кошуу
100018-USG 3.0 NovaSeq v1.5 реагентине жетекчиликти кошуңуз
100018-USG 4.0 Акыркы NovaSeq үчүн толук жетекчиликти кошуңуз

реагенттер

100018-USG 5.0 NextSeq 1000/2000 системасы үчүн жолду кошуу
100018-USG 6.0 96 Multiplex Primer (C-сериясы) маалымат кошуу
100018-USG 7.0 384 Мультиплекстүү праймерлерди кошуу (C,D,E,F-сериялары)

маалымат. Index 2 Primer маалыматын жаңыртуу

Introduction

Бул протокол Illumina® секвенирлөө тутумунда индекстелген жупташкан TELL-Seq™ китепканаларын кантип иштетүү керектигин түшүндүрөт.
TELL-Seq™ китепканасы† каалаган Illumina секвенирлөө тутумдары үчүн ыңгайлаштырылган секвенирлөө праймерлерин талап кылат жана байланышкан окуулар үчүн молекулярдык штрих-код катары колдонулган 18-базалык индекс 1 ырааттуулугун камтыйт, ал толугу менен ырааттуулугу керек.

Комплекттин мазмуну
TELL-Seq™ Illumina® Sequencing Primer Kit (PN 100004)

Universal-Sequencing-TELL-Seq-Library- (1)

TELL-Seq™ Illumina® Sequencing Primer Kit, HT (PN 100013)

Universal-Sequencing-TELL-Seq-Library- (2)

 TELL-Seq™ китепканасынын структурасы жана секвенирлөө схемасы

Universal-Sequencing-TELL-Seq-Library- (3)

Индекс 1 (б.а., I7 индекси) 18-базалык TELL Bead ырааттуулугун камтыйт, алар толугу менен ырааттуулугу КЕРЕК. 2-индекс (б.а., I5 индекси) 8-базалык (T-сериясы) же 10-базалык (C-сериясы) с.ampкитепканада колдонулган le index праймер ырааттуулугу ampлификациялоо. Жупташкан соңку ырааттуулук артыкчылыктуу. Минималдуу окуу узундугу 2×96; Максималдуу окуу узундугу талап 2 × 150 болуп саналат.

Example of Illumina® ырааттуулугу % Базасы боюнча цикл диаграммасы

Universal-Sequencing-TELL-Seq-Library- (4)

 Illumina® Sequencing Guideline

  1. TELL-Seq™ китепканасын Illumina® секвенирлөө платформасынын өзгөчө концентрациясына жана көлөмүнө ылайык суюлтуңуз.
  2. Китепканада ар кандай мультиплекстик праймерлер колдонулганда китепканалар секвенирлөө үчүн бириктирилиши мүмкүн ampлификация кадамы.
  3. TELL-Seq™ китепканаларын ыраатташтыруу үчүн ыңгайлаштырылган секвенирлөөчү праймерлер талап кылынат жана TELL-Seq™ Illumina Sequencing Primer Kit менен камсыз кылынат.
  4. Бул ыңгайлаштырылган секвенирлөө праймерлери ыңгайлаштырылган праймерлер үчүн көрсөтүлгөн скважиналарга жүктөлүшү мүмкүн. Же болбосо, аларды Illumina® PhiX башкаруу китепканасы секвенирлөө режиминде иштетилгенде, тиешелүү стандарттуу Illumina® секвенирлөө праймер скважиналарына жүктөсө болот.
  5. Ыңгайлаштырылган Index 2 праймери ар кандай мультиплекстүү праймерлери бар бир нече TELL-Seq™ китепканалары секвенирлөө үчүн бириктирилгенде жана секвенсер i5 индексинин секвенирлөө праймерин талап кылганда гана керек болот. Учурда MiSeq үчүн гана, ыңгайлаштырылган Index 2 Primer талап кылынбайт. Ошондой эле HiSeq 2000/2500 жана NovaSeq v1 реагенттери сыяктуу колдоого алынбаган системалар үчүн ыңгайлаштырылган Index 2 праймер талап кылынбайт.
  6. Тартиптештирүүнүн минималдуу саны секвенирлөө системасынын негизинде ар түрдүү берилген секвенирлөө праймерлеринин көлөмүн колдонуу менен аткарылышы мүмкүн.
Секвенция системасы Ыңгайлаштырылган Index 2 Primer керекпи?
NovaSeq X/X Plus Ооба
NovaSeq 6000 Ооба
HiSeq 3000/4000 Ооба
NextSeq Ооба
MiSeq Жок
MiniSeq Ооба

Exampле С.ample Sheet MiSeq системасы үчүн
Төмөндө мурункуampле сamp2-цикл индекси 146 (б.а. I18 индекси) жана 1-циклдуу же 7-базалык (C-сериясы) индекси 8 (б.а., I10 индекси) менен 2×5 PE иштөөсү үчүн ле баракты Окуу 1, Индекс 1 жана Окуу 2 үчүн ыңгайлаштырылган секвенирлөө праймерлерин колдонуп, ыңгайлаштырылган приймерлер жакшы жүктөлөт. MiSeq Index 5 окуу үчүн секвенирлөөчү праймер катары агым клеткасынын бетинде P2 праймерин колдонгондуктан, TELL-Seq™ жеке Index 2 праймери MiSeq системасы үчүн талап кылынбайт. Ар кандай топтолгон китепканаларды демультиплекстөө s негизделетample индекс (б.а., индекс 2). Ал секвенирлөө аяктагандан кийин өзүнчө TELL-окуу талдоо түтүгү аркылуу иштетилет.

Universal-Sequencing-TELL-Seq-Library- (5)

Illumina® ырааттуулугун окуу узундугу боюнча сунуш

  1. Жупташкан аягы секвенирлөө сунушталат.
  2. TELL-Seq™ китепкана индекси 1 18 базалык, Индекс 2 8 базалык (T-сериясы) же 10 базалык (C сериясы). Стандарттык Illumina кош индекси үчүн жалпы 26 базага салыштырмалуу эки индекс үчүн жалпы 28-базалык (T-сериясы) же 16-базалык (C-сериясы) бар.
  3. TELL-Seq™ китепкана индексинин секвенирлөө үчүн талап кылынган кошумча 10 циклин 1 окуудан жана 2 иреттөө циклин бирдей окуудан алып салуу керек. Illumina секвенирлөөчү реагент 2 кошумча циклди кепилдегендиктен, 4-окуу үчүн 1-цикл жана 4-окуу үчүн 2-цикл тиешелүүлүгүнө жараша алынып салынышы керек.
  4. Сунушталган секвенирлөө узундугу 2×96 PEден 2×146 PEге чейин кош индексти иштетүү үчүн; Бир с үчүн 2×100 PE 2×150 PEample Index 2 окууга муктаж болбостон иштетүү.

Тереңдикти кароо

  1. Жетиштүү TELL Bead камтуу үчүн шайкеш секвенирлөө тереңдиги талап кылынат. Китепканада ошончолук көп TELL мончоктору колдонулат ampTELL-Seq™ китепканасын түзүү үчүн, каалаган секвенирлөө тереңдигин алуу үчүн ошончолук көп ырааттуу окуулар талап кылынат. Бирок, китепкана үчүн азыраак TELL Beads колдонулат ampлификацияланса, китепкананын татаалдыгы ошончолук төмөн болот, бул окуулардын ырааттуулугунун кайталануу ылдамдыгына алып келиши мүмкүн. Колдонулган TELL Beads менен TELL-Seq™ китепканасынын татаалдыгынын ортосундагы тең салмактуулук геномдун өлчөмүнө жана колдонулушуна жараша болушу мүмкүн.
  2. De novo монтаждоо үчүн, с кеминде 60x геномдук камтууampле жалпысынан сунушталат. Бирок, китепкана үчүн колдонулган TELL Beads көлөмүнө жараша төмөнкү ырааттуулук камтуусу да жетиштүү болушу мүмкүн ampлификация жана TELL-Seq™ китепканасынын татаалдыгы.
  3. For human phasing, at least 500 million cluster reads per sample ~ 40x тереңдик сунушталат.
  4. Максаттуу ырааттуулук үчүн минималдуу 100x камтуу сунушталат.

Library Multiplex Primer Index Sequences (мис., Index 2 Read): T-сериясы (8-база)

Китепкана мультиплекси

Primer (T-сериясы)

S үчүнample Sheet MiSeq S үчүнample Sheet NovaSeq,

NovaSeq X, NextSeq, MiniSeq

T501 TGAACCTT AAGGTTCA
T502 TGCTAAGT ACTTAGCA
T503 TGTTCTCT AGAGAACA
T504 TAAGACAC GTGTCTTA
T505 CTAATCGA TCGATTAG
T506 CTAGAACA TGTTCTAG
T507 TAAGTTCC GGAACTTA
T508 TAGACCTA TAGGTCTA
T509 CATCCGAA TTCGGATG
T510 ТТАТГАГТ ACTCATAA
T511 AGAGGCGC GCGCCTCT
T512 TAGCCGCG CGCGGCTA
T513 АЦГААТАА TTATTCGT
T514 TTCGTAGG CCTACGAA
T515 GATCTGCT AGCAGATC
T516 CGCTCCGC GCGGAGCG
T517 AGGCTATA TATAGCCT
T518 GCCCTAT ATAGAGGC
T519 AGGATAGG CCTTCCT
T520 TCAGAGCC GGCTCTGA
T521 CTTCGCCT AGGCGAAG
T522 ТААГАТТА TAATCTTA
T523 АГТААГТА TACTTACT
T524 GACTTCCT AGGAAGTC

Китепкана Мультиплекстүү Праймер индексинин ырааттуулугу (б.а. Индекс 2 Окуу): C,D,E,F-сериялары (10-база)

Library Multiplex Primer (C-сериясы) S үчүнample Sheet MiSeq S үчүнampSheet NovaSeq, NovaSeq X, NextSeq, MiniSeq
C501 ACGTACGTAC GTACGTACGT
C502 CATGCATGCA TGCATGCATG
C503 GTACGTACGT ACGTACGTAC
C504 TGCATGCATG CATGCATGCA
C505 ATGCTGATCA TGATCAGCAT
C506 CACAGCTGTG CACAGCTGTG
C507 GCTGTCAGC GCTGTCAGC
C508 TGATCAGCAT ATGCTGATCA
C509 ATTCAATACT АГТАТТГААТ
C510 CTAGCGCTAG CTAGCGCTAG
C511 GCTAGTAGTA TACTACTAGC
C512 TCCAATCAAG CTTGATTGGA
C513 AATATTGCTG CAGCAATATT
C514 CGTCGTTACG CGTAACGACG
C515 GATTGATTCC GGAATCAATC
C516 TCTAACAATG CATTGTTAGA
C517 AGAATTGTCA TGACAATTC
C518 CTCAGCAATT AATTGCTGAG
C519 GGTCCTTGTC GACAAGGACC
C520 AGGCCTGACA TGTCAGGCCT
C521 CTCCTAGTGG CCACTAGGAG
C522 GGTTACAGCT AGCTGTAACC
C523 CTGATTGGCG CGCCAATCAG
C524 ATTGGTTAGA TCTAACCAAT
C525 CCATTCAACT АГТТГААТГГ
C526 CAGTATGAC GTCAATACTG
C527 GAGTCCTCAA TTGAGGACTC
C528 AGCTACTACT AGTAGTAGCT
C529 TAGCTAGCGC GCGCTAGCTA
C530 GATGCAACAC GTGTTGCATC
C531 CCTCAGTACA TGTACTGAGG
C532 CGGTAATTCA TGAATTACCG
C533 CGCAATGGCT AGCCATTGCG
C534 GTACGTTGAA TTCAACGTAC
C535 ТТГАТЦАГТА TACTGATCAA
C536 GGCCTAACAA TTGTTAGGCC
C537 GTTGTTGGAA TTCCAACAAC
C538 TACGTTGGAC GTCCAACGTA
C539 ACACCATGCA TGCATGGTGT
C540 GCAATAGTAC GTACTATTGC
C541 ACGCAGCCAG CTGGCTGCGT
C542 CGAGTTGACG CGTCAACTCG
C543 CGTGGCTGAA TTCAGCCACG
C544 TCTCAAGGAC GTCCTTGAGA
C545 CCTAGGCACT AGTGCCTAGG
C546 CTGCGGTAAT ATTACCGCAG
C547 GGCACTACCA TGGTAGTGCC
C548 GCTCAATCAA TTGATTGAGC
C549 AGGCACACAC GTGTGTGCCT
C550 CCTGGCAAGA TCTTGCCAGG
C551 ТААТТГГTAG CTACCAATTA
C552 GCCAACAAGT ACTTGTTGGC
C553 ATGGCTATA TATAAGCCAT
C554 GCATGGCCTT AAGGCCATGC
C555 ACAATACTGG CCAGTATTGT
C556 GGATTGGACT AGTCCAATCC
C557 ACTGTACTAT ATAGTACAGT
C558 CAGCTGTGAG CTCACAGCTG
C559 CTTGAGGACC GGTCCTCAAG
C560 GGTACAATAG CTATTGTACC
C561 CTGACTA TAGTAGTCAG
C562 TCAACCATGG CCATGGTTGA
C563 ATTATAACCG CGGTTATAAT
C564 ACTAGTCCTT AAGGACTAGT
C565 ACTTGGACGT ACGTCCAAGT
C566 ATGGTTAGGA TCCTAACCAT
C567 ATGGTACCAA TTGGTACCAT
C568 GAATTGACTC GAGTCAATTC
C569 AGCAACCAGG CCTGGTTGCT
C570 TACTGTGCTG CAGCACAGTA
C571 CAACAACGTC GACGTTGTTG
C572 CAGTAGCGCT AGCGCTACTG
C573 ATTACCAATC ГАТТГГТААТ
C574 TAAGGACCGC GCGGTCCTTA
C575 ACACGTACCG CGGTACGTGT
C576 CAACGTTGTT AACAACGTTG
C577 ATTGTGCTGA TCAGCACAAT
C578 GTACCAACAG CTGTTGGTAC
C579 TTGTCAAGGA TCCTTGACAA
C580 CTTGTACGTA TACGTACAAG
C581 TGCCTTGTAA TTACAAGGCA
C582 TAGTAGCTTA TAAGCTACTA
C583 GACCGCAATG CATTGCGGTC
C584 CTACTAGCTT AAGCTAGTAG
C585 AGCACACGTT AACGTGTGCT
C586 TGTTATAAGC GCTTATAACA
C587 GTTGCCAAGT ACTTGGCAAC
C588 CTGGCAACCG CGGTTGCCAG
C589 TTAGGCCTTA TAAGGCCTAA
C590 CGCAGCACAG CTGTGCTGCG
C591 CTAGGCACAA TTGTGCCTAG
C592 TGTTGTACAG CTGTACAACA
C593 CTAACGTGGC GCCACGTTAG
C594 GCGTACTGGT ACCAGTACGC
C595 GGCCTGAATT AATTCAGGCC
C596 CATGCTCGAG CTCGAGCATG
Library Multiplex Primer (D-сериясы) S үчүнample Sheet MiSeq S үчүнampSheet NovaSeq, NovaSeq X, NextSeq, MiniSeq
D501 AGCACTGTAA TTACAGTGCT
D502 CCGAAGACT AGTACTTCGG
D503 ГТТАЦААГТА TACTTGTAAC
D504 TGATTGCGTG CACGCAATCA
D505 ATCTTAGGCA TGCCTAAGAT
D506 CACGCAAGTT AACTTGCGTG
D507 GAGCTTAGGA TCCTAAGCTC
D508 TATTGCTCGA TCGAGCAATA
D509 AACATCTGAG CTCAGATGTT
D510 CAACTCAGCA TGCTGAGTTG
D511 ГААКТАТАТГ CATATAGTTC
D512 TAATAGTCTA TAGACTATTA
D513 AAGATTGACG CGTCAATCTT
D514 CACGTAGCCG CGGCTACGTG
D515 GACTCGATCA TGATCGAGTC
D516 TAATCCTCGC GCGAGGATTA
D517 AAGCTCCTGG CCAGGAGCTT
D518 CAGATTGTTG CAACAATCTG
D519 GATGCTATTC GAATAGCATC
D520 TAATCCTCGC GCGAGGATTA
D521 AAGTATACCT AGGTATACTT
D522 CAGTAGCCAA TTGGCTACTG
D523 GCAAGGACTC GAGTCCTTGC
D524 TACTACTGTA TACAGTAGTA
D525 AATCCTAGCT AGCTAGГАТТ
D526 CATTGGCAAG CTTGCCAATG
D527 GCCTGAGAAT ATTCTCAGGC
D528 TACTAGCAAG CTTGCTAGTA
D529 ACAGCTAGTC GACTAGCTGT
D530 CCAACCAGTA TACTGGTTGG
D531 GCGCTCAATT AATTGAGCGC
D532 TAGCGCGGAC GTCCGCGCTA
D533 ACCTATAGTT AACTATAGGT
D534 CCACGTCAGG CCTGACGTGG
D535 GCTACGCAAT ATTGCGTAGC
D536 TAGTTGCTGC GCAGCAACTA
D537 ACGGTACAAC GTTGTACCGT
D538 CCGAACTTCG CGAAGTTCGG
D539 GCTCCTAATT AATTAGGAGC
D540 TATCCTCGAT ATCGAGGATA
D541 ATCGATTCT AGAATCGAGT
D542 CCTGGTAATT AATTACCAGG
D543 TCGTAGTTGG CCAACTAAGC
D544 TCAGCAAGGA TCCTTGCTGA
D545 ACTGGTAGCA TGCTACCAGT
D546 CGATCAACCT AGGTTGATCG
D547 GGAAGTAGCA TGCTACTTCC
D548 TCAGCTGCGG CCGCAGCTGA
D549 ACTGGTAGCA TGCTACCAGT
D550 CGATCAACCT AGGTTGATCG
D551 GGCAAGATGA TCATCTTGCC
D552 TCCGCCAATG CATTGGCGGA
D553 AGAATCTAT ATAAGTTCT
D554 CGCTAGCAAC GTTGCTAGCG
D555 GGCCTTATAT ATATAAGGCC
D556 TCGAATACTA TAGTATTCGA
D557 АГЦААТГГТА TACCATTGCT
D558 CGGTCTGATC GATCAGACCG
D559 GGTCCGCCAT ATGGCGGACC
D560 TCGAATACTA TAGTATTCGA
D561 AGCACTGTAA TTACAGTGCT
D562 CGTACTACCG CGGTAGTACG
D563 GGTTCATCGG CCGATGAACC
D564 TCGGAGCTGC GCAGCTCCGA
D565 AGGACGTTAG CTAACGTCCT
D566 CGTTGACAAT ATTGTCAACG
D567 GTACTGACAC GTGTCAGTAC
D568 TCTAAGATAG CTATCTTAGA
D569 AGTGCTCAAC GTTGAGCACT
D570 CTAAGAACCT AGGTTCTTAG
D571 GTATAATTAC GTAATTATAC
D572 TGATTGCGTG CACGCAATCA
D573 ATATTCGACG CGTCGAATAT
D574 CTATAACGAC GTCGTTATAG
D575 GTCGTTAGGT ACCTAACGAC
D576 TGCCACTGAT ATCAGTGGCA
D577 ATCGGCTAAG CTTAGCCGAT
D578 CTCAAGTTGC GCAACTTGAG
D579 GTGTGTTCGA TCGAACACAC
D580 TGCTATAGTC GACTATAGCA
D581 ATGAGCTATT AATAGCTCAT
D582 CTCACAACGA TCGTTGTGAG
D583 TGCTCGATTG CAATCGAGCA
D584 ATGTTGGACT AGTCCAACAT
D585 CTGATGTTAG CTAACATCAG
D586 TGGTAACCAG CTGGTTACCA
D587 АТЦГААГТА TACTTCGAAT
D588 CTTAGCTCCT AGGAGCTAAG
D589 TGTAATCGAT АТКГАТТАКА
D590 CTTGGACTTC GAAGTCCAAG
D591 TGTACTTGAA TTCAAGTACA
D592 TTAAGCTCAG CTGAGCTTAA
D593 TTACAACCAG CTGGTTGTAA
D594 TTTCAGCCA TGGCTGAGAA
D595 TTGCATGGCT AGCCATGCAA
D596 TTGGCGGTAC GTACCGCCAA
Library Multiplex Primer (E-серия) S үчүнample Sheet MiSeq S үчүнampSheet NovaSeq, NovaSeq X, NextSeq, MiniSeq
E501 AGCCACGGTC GACCGTGGCT
E502 CCGCCTGAGT ACTCAGGCGG
E503 GTTATATACC GGTATATAAC
E504 CTTCCTGGCA TGCCAGGAAG
E505 ATCGAATTGC GCAATTCGAT
E506 CACGTGTTGT ACAACACGTG
E507 GAGCTGTGTT AACACAGCTC
E508 ТАТТАЦАГАТ ATCTGTAATA
E509 AACAATGGCG CGCCATTGTT
E510 CAACTCGCTA TAGCGAGTTG
E511 GAATTGCTCA TGAGCAATTC
E512 GTGTGTTCGA TCGAACACAC
E513 CGATTCGAGC GCTCGAATCG
E514 GTCAACGTTA TAACGTTGAC
E515 GACAATCCTA TAGGATTGTC
E516 TAATCAGACT АГТЦТГАТТА
E517 AAGCTTTATAT ATATAAGCTT
E518 CATATTGTAA ТТАЦААТГ
E519 GATAGGACTT AAGTCCTATC
E520 ATGCTAGGTT AACCTAGCAT
E521 GCAAGATTAG CTAATCTTGC
E522 CAGCTGTATA TATACAGCTG
E523 GCAAGTCTAA TTAGACTTGC
E524 TACTAGCAAG CTTGCTAGTA
E525 AATACTGTTA TAACAGTATT
E526 CATATCTGAC GTCAGATATG
E527 GCCACTAAGG CCTTAGTGGC
E528 CTGGCAATTC GAATTGCCAG
E529 ACAATAGGCG CGCCTATTGT
E530 CCATGCTAAG CTTAGCATGG
E531 GCGAGCGATC GATCGCTCGC
E532 TAGGTAGTTC GAACTACCTA
E533 ACCTTGGACC GGTCCAAGGT
E534 TGACTAATAC GTATTAGTCA
E535 GCTATATCTG CAGATATAGC
E536 TCTAGTTCAG CTGAACTAGA
E537 ACGGTTGAGA TCTCAACCGT
E538 CTGATTCCGG CCGGAATCAG
E539 TGGTAACCAG CTGGTTACCA
E540 GACTCAGACA TGTCTGAGTC
E541 TTAGCCAATA TATTGGCTAA
E542 CCTTAAGGCG CGCCTAAGG
E543 CGTAGCAATC GATTGCTACG
E544 CATGGCTAAT ATTAGCCATG
E545 ATCGACAAT ATTGTCGAGT
E546 CGAGTCTAGG CCTAGACTCG
E547 GGACTCAGCT AGCTGAGTCC
E548 TCAGCAAGGA TCCTTGCTGA
E549 CGATTCCTTA TAAGGAATCG
E550 ATTAGGCAAT ATTGCCTAAT
E551 TTGTCGAAGG CCTTCGACAA
E552 TCCAAGTAGC GCTACTTGGA
E553 AGATAGTCCG CGGACTATCT
E554 CGCTAACATA ТАТГТTAGCG
E555 GGCTAATTGT ACAATTAGCC
E556 AGGTACGTCA TGACGTACCT
E557 TTCCAAGTTC GAACTTGGAA
E558 CGGAGCTCCG CGGAGCTCCG
E559 ГГТАКТААТА TATTAGTACC
E560 TCGAAGGCAA TTGCCTTCGA
E561 CTCCTTGATG CATCAAGGAG
E562 GCAATTCGG CCGGAATTGC
E563 ACTACGCAGC GCTGCGTAGT
E564 AGGAATGGCC GGCCATTCCT
E565 AGGTTAGCAT ATGCTAACCT
E566 CGTCCTAGAC GTCTAGGACG
E567 GCGTGGCAAT ATTGCCACGC
E568 TCTGATCGAC GTCGATCAGA
E569 AGTTGTCAGG CCTGACAACT
E570 CTACGCCAAT ATTGGCGTAG
E571 GTAGTTGCGT ACGCAACTAC
E572 TGAGCGCTAT ATAGCGCTCA
E573 ATACCTTAGT АКТААГГАТ
E574 GCACACCAT AATGGTGTGC
E575 GTCTAAGGAG CTCCTTAGAC
E576 CATTCCGCGG CCGCGGAATG
E577 GCGTACCTAG CTAGGTACGC
E578 CTCAATAGCA TGCTATTGAG
E579 GTGCTAAGCC GGCTTAGCAC
E580 TGCCACTATC GATAGTGGCA
E581 GCTGTTGAAT ATTCAACAGC
E582 CGGCTAATCC GGATTAGCCG
E583 AACTACCGCA TGCGGTAGTT
E584 ATGCATCAAG CTTGATGCAT
E585 CTGACTTGCA TGCAAGTCAG
E586 TGGTACCTAT ATAGGTACCA
E587 ATTAGCTAAC GTTAGCTAAT
E588 TGGTACCTAT ATAGGTACCA
E589 TGTTGCTACC GGTAGCAACA
E590 CTTATATAAG CTTATATAAG
E591 TCAAGTCTGT ACAGACTTGA
E592 TGAGCGCTAT ATAGCGCTCA
E593 TTAGGCGTAC GTACGCCTAA
E594 TTCTCATCAG CTGATGAGAA
E595 CTAGGTATTG CAATACCTAG
E596 TTGCTGACTA TAGTCAGCAA
Library Multiplex Primer (F-сериясы) S үчүнample Sheet MiSeq S үчүнample Sheet NovaSeq, NovaSeq X, Next Seq, MiniSeq
F501 AGCCAGTAGC GCTACTGGCT
F502 CCGATGAGTT AACTCATCGG
F503 GTTCAACTTC GAAGTTGAAC
F504 TTGAGCATCA TGATGCTCAA
F505 ATCAACAGTG CACTGTTGAT
F506 CACACGGTAG CTACCGTGTG
F507 GAGGATTGCT AGCAATCCTC
F508 TATCTTGGCC GGCCAAGATA
F509 AACTAGTGGC GCCACTAGTT
F510 CAATCCTGGT ACCAGGATTG
F511 GAAGGTTACG CGTAACCTTC
F512 CTAAGAACCT AGGTTCTTAG
F513 CACACGGTAG CTACCGTGTG
F514 AATTAGTCTG CAGACTAATT
F515 GACCGTGTTA TAACACGGTC
F516 TAATTCGAGG CCTCGAATTA
F517 AAGATTGACG CGTCAATCTT
F518 CAACTCGCTA TAGCGAGTTG
F519 GATTCGAACT AGTTCGAATC
F520 GCCTTGAGTT AACTCAAGGC
F521 CACAGATTAG CTAATCTGTG
F522 CAGCTAGGCC GGCCTAGCTG
F523 GCAAGGTATA TATACCTTGC
F524 TACCTAGGTA TACCTAGGTA
F525 AATCCTTGAA ТТЦААГГАТТ
F526 CATCGAACCT AGGTTCGATG
F527 GCCTGCGTAA TTACGCAGGC
F528 CATCGAACCT AGGTTCGATG
F529 ACAGTGCCAT ATGGCACTGT
F530 CCAACTATTG CAATAGTTGG
F531 GCGTACCGCA TGCGGTACGC
F532 TAGGAGCGAT ATCGCTCCTA
F533 ACCATTGGT ACCATTGGT
F534 AATACTGTTA TAACAGTATT
F535 GCTGTTGAAT ATTCAACAGC
F536 TTACAACCAG CTGGTTGTAA
F537 ACGTCAAGTC GACTTGACGT
F538 CAATTCAATG CATTGAATTG
F539 TGAATTCAGC GCTGAATTCA
F540 ACGTACAGCT AGCTGTACGT
F541 TGACTACCAT ATGGTAGTCA
F542 CCTGGTGTGA TCACACCAGG
F543 GACTAATCGC GCGATTAGTC
F544 ACGTTAGTGC GCACTAACGT
F545 ATCGATTCT AGAATCGAGT
F546 CGACAAGATT AATTCTTGTCG
F547 GGAATTGGCT AGCCAATTCC
F548 TCACAGCCGA TCGGCTGTGA
F549 CTGTACTGTA TACAGTACAG
F550 TCGCTCGAGG CCTCGAGCGA
F551 ACCTTAGCAA TTGCTAAGGT
F552 TCCGGACTAC GTAGTCCGGA
F553 AGAACTTGCA TGCAAGTTCT
F554 CGCAGGACTT AAGTCCTGCG
F555 GGCAAGATGA TCATCTTGCC
F556 GCCTAGCGCG CGCGCTAGGC
F557 GACATCGCTA TAGCGATGTC
F558 CGGCTAATCC GGATTAGCCG
F559 GGTTGAGCTT AAGCTCAACC
F560 TCGCTCAGGC GCCTGAGCGA
F561 GCTGATTATA TATAATCAGC
F562 GCGCTAGTCC GGACTAGCGC
F563 TATGTCTGAA TTCAGACATA
F564 AAGCTTTATAT ATATAAGCTT
F565 AGGAATGGCC GGCCATTCCT
F566 CGTAGCGCGC GCGCGCTACG
F567 GCCTGCGTAA TTACGCAGGC
F568 TCTTAGCGAT ATCGCTAAGA
F569 АГТТЦТААГА TCTTAGAACT
F570 CTAGGTATTG CAATACCTAG
F571 GTAGTACTAC GTAGTACTAC
F572 TGACAAGTAG CACTTGTCA
F573 ATAGTCTGAG CTCAGACTAT
F574 CTGTGTTACA TGTAACACAG
F575 GTCTAGCCAC GTGGCTAGAC
F576 AATCAAGGTT AACCTTGATT
F577 CATAATTATG CATAATTATG
F578 CTCGAGCTAT ATAGCTCGAG
F579 GTGCCTGATG CATCAGGCAC
F580 TGCTCGATTG CAATCGAGCA
F581 GATTCGAACT AGTTCGAATC
F582 TCGTTGAGGA TCCTCAACGA
F583 AGCCAGGCGT ACGCCTGGCT
F584 ATGTCAGATT AATCTGACAT
F585 CTGTATATAC GTATATACAG
F586 TGGTGTCAAC GTTGACACCA
F587 ATTGCATGCT AGCATGCAAT
F588 АГТАТТКАТА TATGAATACT
F589 TGTAATTCCG CGGAATTACA
F590 CTTCCTGGCA TGCCAGGAAG
F591 TCCGCGCGGA TCCGCGCGGA
F592 CACTGTTCGG CCGAACAGTG
F593 TTAGCCAATA TATTGGCTAA
F594 TTCGAGCTGA TCAGCTCGAA
F595 GTACCGCGCG CGCGCGGTAC
F596 TTGAGCATCA TGATGCTCAA

Тиркеме

TELL-Seq™ ыңгайлаштырылган праймерлерин Illumina® секвенирлөөчү праймерлерине кошуу
TELL-Seq™ китепканалары Illumina секвенирлөө платформалары үчүн ыңгайлаштырылган секвенирлөө праймерлерин талап кылат. Ыңгайлаштырылган TELL-Seq™ Illumina секвенирлөөчү праймерлерин стандарттуу Illumina секвенирлөө праймерлерине түртүп (же айкалыштыруу) PhiX башкаруу китепканасын же TELL-Seq™ китепканалары менен башка стандарттуу Illumina китепканаларын секвенирлөө процессине кошкондо зарыл.

Эскертүү: TELL-Seq™ Index 1 окуу 18-базага ээ жана 18-цикл секвенирлөө керек; 2-окуу индексинде T-сериясынын праймери үчүн 8-базасы жана С-сериясынын праймери үчүн 10-базасы бар.

Ыңгайлаштырылган праймерлерди Illumina праймерлерине кошуу процедурасы

  • Ар бир платформа үчүн картридждин абалы, жалпы көлөмү жана ыңгайлаштырылган праймерлердин акыркы концентрациясы төмөнкү таблицаларда берилген.
  • Картридждеги ыңгайлаштырылган праймердин акыркы концентрациясынын негизинде Illumina праймер картриджинин абалына кошуу үчүн ыңгайлаштырылган праймердин көлөмүн эсептеңиз.*
  • Ыңгайлаштырылган праймерди киргизгенден кийин, пипетканы жалпы көлөмдүн жарымына тууралаңыз жана кылдат аралаштыруу үчүн акырын беш жолу өйдө-ылдый пипетка менен сүртүңүз.
  • MiSeq, MiniSeq, NextSeq жана NovaSeq платформалары үчүн, s ичиндеги "ыңгайлаштырылган праймер" кутучасынын абалын белгилебеңиз.ample баракты же иштетүү орнотуу учурунда.

* Скважинага канча ыңгайлаштырылган праймерди кошууну эсептөө үчүн (C1)*(V1) = (C2)*(V2) теңдемесин колдонуңуз, мында:

  • C1 = 100μM (100μM жогорку концентрациядагы праймер запасын колдонгондо, акыркы көлөмгө кичине кошумча көлөм анча деле маанилүү эмес).
  • V1 = ыңгайлаштырылган праймердин көлөмүн чечиңиз
  • C2 = төмөнкү диаграммадан сунушталган жеке праймердин акыркы концентрациясы V2 = төмөнкү диаграммалардагы Illumina праймеринин жалпы көлөмү

Example MiSeq платформасы үчүн

100μM * V1 = 0.5μM * 680μL V1 = 3.4 мкл

Маанилүү эскертүү: Төмөнкү көрсөтмөлөр учурдагы праймердин көлөмүнө негизделген. Тактыгын камсыз кылуу үчүн, орнотууну улантуудан мурун картридждеги праймердин жалпы көлөмүн пипетка менен өлчөңүз.

Ар бир Illumina® секвенсеринин ар кандай акыркы концентрациясы жана жалпы көлөмү бар, андыктан TELL-Seq™ Illumina® секвенирлөөчү праймерлеринин тийиштүү көлөмү түздөн-түз кошулуп жатканын текшерүү үчүн төмөндөгү документти караңыз.

*Эскертүү: Индекс 1 жана Индекс 2 жана Окуу 1 жана Окуу 2 праймерлери көбүнчө реагент картриджинин кудугуна бириктирилет. Сураныч, скважина үчүн акыркы концентраттык праймер ар бир праймерден (мисалы, 0.3μM Индекс 1 жана Индекс 2 жалпысынан 0.6μM) экендигин текшериңиз.
<https://knowledge.illumina.com/library-preparation/general/library-preparation-general-reference_material-list/000001542>
Төмөндө

iSeq100
iSeq100 картриджинин курулушуна байланыштуу, ыңгайлаштырылган праймерлерди жүктөө жана колдонуу мүмкүн эмес.

MiniSeq

Universal-Sequencing-TELL-Seq-Library- (6)

NextSeq

Universal-Sequencing-TELL-Seq-Library- (7)

MiSeq

Universal-Sequencing-TELL-Seq-Library- (8)

* Ыңгайлаштырылган Index 2 (i5) праймеринин варианты жок, анткени шаблон агым клеткасынын бетинде кыйыштырылган P5 праймерин колдонот.

HiSeq 1000/2000 – 1500/2300 Universal-Sequencing-TELL-Seq-Library- (9)

* Ыңгайлаштырылган Index 2 (i5) праймеринин варианты жок, анткени шаблон агым клеткасынын бетинде кыйыштырылган P5 праймерин колдонот.

HiSeq 3000/4000

Universal-Sequencing-TELL-Seq-Library- (10)

NovaSeq v1.0 Сарпталуучу материалдар

Комплект версиясы Illumina Primer (аты-жөнү) Картридждин абалы Бардыгы Көлөм (мл) Ыңгайлаштырылган праймер акыркы концентрация (µM)
 

SP

100/200/300/500 цикл

Окуу 1 (BP10) 24 4 0.3
Индекс 1 (i7) (BP14)* 23 5 0.3
Окуу 2 (BP11) 13 2 0.3
 

S1 жана S2 100/200/300 циклдер

Окуу 1 (BP10) 24 4 0.3
Индекс 1 (i7) (BP14)* 23 5 0.3
Окуу 2 (BP11) 13 2 0.3
 

S4

200/300 цикл

Окуу 1 (BP10) 24 7.3 0.3
Индекс 1 (i7) (BP14)* 23 5 0.3
Окуу 2 (BP11) 13 3.5 0.3

* Ыңгайлаштырылган Index 2 (i5) праймеринин варианты жок, анткени шаблон агым клеткасынын бетинде кыйыштырылган P5 праймерин колдонот.

NovaSeq v1.5 Сарпталуучу материалдар

Комплект версиясы Illumina Primer (аты-жөнү) Картридждин абалы Бардыгы Көлөм (мл) Ыңгайлаштырылган праймер акыркы концентрация (µM)
 

SP

100/200/300/500 цикл

1 окуу (VP10) 24 4 0.3
Индекс 1 (i7) жана Индекс 2 (i5) (VP14) 23 5 0.3
2 окуу (VP11) 13 2 0.3
 

S1 жана S2 100/200/300 циклдер

1 окуу (VP10) 24 4 0.3
Индекс 1 (i7) жана Индекс 2 (i5) (VP14) 23 5 0.3
2 окуу (VP11) 13 2 0.3
 

S4

200/300 цикл

1 окуу (VP10) 24 7.3 0.3
Индекс 1 (i7) жана Индекс 2 (i5) (VP14) 23 5 0.3
2 окуу (VP11) 13 3.5 0.3

NovaSeq X/X Plus

Universal-Sequencing-TELL-Seq-Library-01

NextSeq™ 1000/2000 системасында TELL-Seq™ Run орнотуу
NextSeq™ 1000/2000 реагент картриджинде китепканага жок дегенде бир ыңгайлаштырылган праймер талап кылынганда колдонула турган эки ыңгайлаштырылган скважина бар (1 жана 2, экөө тең бош). Ал ар бир ыңгайлаштырылган скважина үчүн эки ыңгайлаштырылган праймерди (бассейнди) колдойт. Окуу праймери жана Индекс праймери башка скважиналарда болушу керек.

Universal-Sequencing-TELL-Seq-Library- (11)

TELL-Seq™ китепканалары бардык окуулар үчүн ыңгайлаштырылган праймерлерди талап кылат (1-окуу, 2-окуу, индекс 1 жана индекс 2). Качан гана TELL-Seq™ китепканалары ырааттуу түрдө иштетилгенде

  • TELL-Seq™ окуу 1ди жана 2 праймерди окууну бириктириңиз: 1 μМ акыркы концентрацияда 600 мкл алуу үчүн ар бир жеке окуу праймер аралашмасын суюлтуу үчүн HT0.3ди колдонуңуз, башкача айтканда, 1.8 мкл 100 μM TELL-Seq™ окуу 1 праймерди жана 1.8 μl TELL-Seq 100q примерди окуу. мкл HT2. Аны ыңгайлаштырылган кудукка жүктөңүз 597.
  • TELL-Seq™ индекс 1 менен индекс 2 праймерлерин бириктириңиз: 1 µM акыркы концентрацияда 600 мкл, б.а., 0.6 мкл 3.6 μM TELL-Seq™ индексинин 100 праймери жана 1 μl TELL-Seq™ ELL™-Seq™ индексинин 3.6 мкл алуу үчүн ар бир жеке индекстин праймер аралашмасын суюлтуу үчүн HT100ди колдонуңуз. 2 мкл HT593ге 1 праймер. Аны ыңгайлаштырылган кудукка жүктөңүз 2.
  • Төмөнкүдөй ырааттуулукту орнотууда туура ыңгайлаштырылган праймерди тандаңыз:
    • Оку 1: Ыңгайлаштырылган 1
    • Индекс 1: Ыңгайлаштырылган 2
    • Индекс 2: Ыңгайлаштырылган 2
    • Оку 2: Ыңгайлаштырылган 1

PhiX китепканалары TELL-Seq™ китепканалары менен иштөөдө секвенирлөө үчүн колдонулганда

  • NextSeq 1000/2000 Read Primer топтомун алыңыз (Каталог# 20046117)
  • Universal-Sequencing-TELL-Seq-Library- (13)TELL-Seq™ окуу 1ди бириктирип, 2 праймерди HP21ге окуңуз: 600 µM акыркы концентрация үчүн ар бир жеке окуу праймер аралашмасын 21 мкл HP0.3ге кошуңуз, б.а., 1.8 мкл 100 µM TELL-Seq™ окуу 1 праймер жана 1.8 мкл ELL ELL-Seq™ 100 µl primer окуу HP2. Аны ыңгайлаштырылган кудукка жүктөңүз 597.
  • TELL-Seq™ индекс 1 менен индекс 2 праймерлерин бириктириңиз: 1 µM акыркы концентрацияда 600 мкл, б.а., 0.6 мкл 3.6 μM TELL-Seq™ индексинин 100 праймери жана 1 μl TELL-Seq™ ELL™-Seq™ индексинин 3.6 мкл алуу үчүн ар бир жеке индекстин праймер аралашмасын суюлтуу үчүн HT100ди колдонуңуз. 2 мкл HT593ге 1 праймер. Аны ыңгайлаштырылган кудукка жүктөңүз 2.
  • Төмөнкүдөй ырааттуулукту орнотууда туура ыңгайлаштырылган праймерди тандаңыз:
    • Оку 1: Ыңгайлаштырылган 1
    • Индекс 1: Ыңгайлаштырылган 2
    • Индекс 2: Ыңгайлаштырылган 2
    • Оку 2: Ыңгайлаштырылган 1

Кош индекстүү Illumina китепканалары TELL-Seq™ китепканалары менен катар тизилгенде

  • NextSeq 1000/2000 Окуу жана Индекс Primer топтомун алуу (Каталог# 20046115) Universal-Sequencing-TELL-Seq-Library- (12)
  • TELL-Seq™ окуу 1ди бириктирип, 2 праймерди HP21ге окуңуз: 600 µM акыркы концентрация үчүн ар бир жеке окуу праймер аралашмасын 21 мкл HP0.3ге кошуңуз, б.а., 1.8 мкл 100 µM TELL-Seq™ окуу 1 праймер жана 1.8 мкл ELL ELL-Seq™ 100 µl primer окуу HP2. Аны ыңгайлаштырылган кудукка жүктөңүз 597.
  • TELL-Seq™ индекс 1 менен индекс 2 праймерлерин BP14ке бириктириңиз: 600 µM акыркы концентрация үчүн ар бир жеке индекстин праймер аралашмасын 14 мкл BP0.6 кошуңуз, б.а. 3.6 мкл BP100 ичине 1 праймер. Аны ыңгайлаштырылган кудукка жүктөңүз 3.6.
  • Төмөнкүдөй ырааттуулукту орнотууда туура ыңгайлаштырылган праймерди тандаңыз:
    • Оку 1: Ыңгайлаштырылган 1
    • Индекс 1: Ыңгайлаштырылган 2
    • Индекс 2: Ыңгайлаштырылган 2
    • Оку 2: Ыңгайлаштырылган 1

Документтер / Ресурстар

Universal Sequencing TELL-Seq китепканасы [pdf] Колдонуучунун колдонмосу
TELL-Seq китепканасы, TELL-Seq, китепкана

Шилтемелер

Комментарий калтырыңыз

Сиздин электрондук почта дарегиңиз жарыяланбайт. Талап кылынган талаалар белгиленген *