FDA Сандык Иммуно ПТР аныктоо

Продукт маалыматы

Продукт убакыттын өтүшү менен плазмадагы IP-10 деңгээлин аныктоо үчүн иштелип чыккан сандык иммуно-ПЦР анализи. Ал атайын интерферон бета-1а (IFN-1a) жана пегилирленген IFN-1a сыяктуу IFN-1 биологиясынын талапкер фармакодинамикалык биомаркери катары иштелип чыккан.
(pegIFN-1a). Анализ биосимилярларды бекитүүнү колдоо жана кийинки клиникалык тестирлөөгө жетекчилик кылуу үчүн клиникалык фармакодинамикалык окшоштук маалыматтарын берүүгө арналган.

Талдоо плазманын протеомикалык анализин колдонотampмаксаттуу биомаркер катары IP-10, интерферон-гамма-индукциялануучу протеин-10ду аныктоо үчүн. Бул плазмадагы IP-10 деңгээлин сандык өлчөөнү сунуш кылатamples, убакыттын өтүшү менен анын концентрациясын баалоого мүмкүндүк берет.

Негизги өзгөчөлүктөрү:

• Сандык иммуно-ПЦР анализи
• Максаттуу биомаркер: Интерферон-гамма-индукциялануучу протеин-10 (IP-10)
• IFN-1 биологиялык препараттар үчүн иштелип чыккан (IFN-1a жана pegIFN-1a)
• Клиникалык фармакодинамикалык окшоштук маалыматтарын берет
• Биосимилярларды бекитүүнү колдойт
• Кийинки клиникалык сыноолорду жетектейт

Продукт колдонуу нускамалары

Сандык иммундук-ПЦР анализин колдонуу үчүн бул нускамаларды аткарыңыз:

1. Плазманы чогултуу сampСтандарттык протоколдор боюнча субъекттерден же пациенттерден.
2. Берилген көрсөтмөлөргө ылайык анализ реагенттерин даярдаңыз.
3. Плазманы эритүү сampанализди баштаардан мурун бөлмө температурасында болушун текшериңиз.
4. s ылайык микропластинанын кудуктарын белгилөөample идентификация.
5. Ар бир плазманын тиешелүү көлөмүн кошуңузampле белгиленген скважиналарга.
6. Ар бир скважинага анализ реагенттерин кошуңуз, көрсөтүлгөн көлөмдөрдү жана аралаштыруу нускамаларын аткарыңыз.
7. Микропластинаны жабыңыз жана s туура аралашуусун камсыз кылуу үчүн акырын чайкаңызampлес жана реагенттер.
8. Микропластинаны сунушталган температурада жана узактыкта ​​инкубациялаңыз.
9. Инкубациядан кийин микропластинанын тешиктерин бардык байланышпаган заттарды алып салуу үчүн жакшылап жууп салыңыз.
10. Ар бир скважинага аныктоо реагенттерин кошуп, көрсөтүлгөн көлөмдөрдү жана аралаштыруу көрсөтмөлөрүн аткарыңыз.
11. Микропластинаны жабыңыз жана аныктоо реагенттеринин туура аралашышын камсыз кылуу үчүн акырын чайкаңыз.
12. Микропластинаны кайра сунушталган температурада жана узактыкта ​​инкубациялаңыз.
13. Инкубациядан кийин микропластинанын тешиктерин бардык байланышпаган аныктоочу реагенттерди алып салуу үчүн жакшылап жуугула.
14. Ар бир скважинага субстрат эритмесин кошуп, көрсөтүлгөн көлөмдөрдү жана аралаштыруу көрсөтмөлөрүн аткарыңыз.
15. Микропластинаны акыркы жолу сунушталган температурада жана узактыкта ​​инкубациялаңыз.
16. Ар бир скважинага токтотуу эритмесин кошуу менен реакцияны токтотуңуз.
17. Ар бир скважинанын абсорбенциясын же флуоресценциясын туура келген пластина окугучун колдонуңуз.
18. Ар бир плазмадагы IP-10 концентрациясын эсептеңизample берилген стандарттык ийри сызыктын же калибрлөө теңдемесинин негизинде.

Эскертүү: Так жана ишенимдүү натыйжаларга жетишүү үчүн продукт менен бирге берилген деталдуу нускамаларды кылдат окуп чыгуу жана аткаруу сунушталат. Реагенттерди туура колдонуу жана сактооamples анализ аткаруу үчүн абдан маанилүү болуп саналат.

Убакыттын өтүшү менен плазманын IP-10 деңгээлинин сандык иммуно-ПЦР аныктоо:
INFβ-1 биологиясынын кандидаты фармакодинамикалык биомаркер
Дипти П. Самарт1, Лакшми Манаса С. Чекка1, Барри Розенцвейг1, Джеффри Флориан1, Дэвид Г. Штраус1, Паула Л. Хиланд1 Колдонмо жөнгө салуу илимдеринин бөлүмү, Клиникалык Фармакология кеңсеси (OCP) / Котормо илимдеринин кеңсеси (OTS) / Drug Evalu Centerfor жана изилдөө (CDER), АКШнын FDA, Silver Spring, MD 1

Реферат

• Фон: Клиникалык фармакодинамикалык окшоштук маалыматтары биосимилярларды бекитүүнү колдогон далилдердин жыйындысына салым кошо алат жана кийинки клиникалык тестирлөөнүн зарылдыгын көрсөтө алат. Плазманын протеомикалык анализи сampIFNβ-10 биологиясынын (интерферон бета-10а [IFNβ-1a] жана пегилирленген IFNβ-1a [" талапкер фармакодинамикалык (PD)" биомаркери катары интерферон-гамма-индукциялануучу протеин-1 (IP-1) FDA жүргүзгөн клиникалык сыноодон алынган. pegIFNβ-1a]).
• Максаты: Плазмадагы IP-10 деңгээлинин техникалык репликациясы үчүн сандык иммуно-ПЦР анализин баалоо.
• Окуу дизайны: Биз плазманы колдондукampIFNβ-36a жана pegIFNβ-1a менен жүргүзүлгөн плацебо көзөмөлүндөгү рандомизацияланган клиникалык сыноодон 1 дени сак субъекттен алынган.
• Методдор: Коммерциялык анализ (ProQuantum, ThermoFisher Scientific) IFNβ-10a тобунда 10 күндүн ичинде 6 убакыт чекиттеринде IP-1 өлчөө үчүн колдонулган
  (n=12 [30µg]), pegIFNβ-12a тобунда (n=13 [1μg]) жана плацебо-спецификалык топтордо (ар бири n=12) 125 күндүн ичинде 6 убакыт чекитинде. Концентрациялар стандарттуу ийри талдоодон экстраполяцияланган. Дифференциалдык туюнтуу үчүн биз сызыктуу аралаш эффект моделдеринде ANOVA жүргүздүк. F-сынагы жана таасир этүүчү аймак ийри сызыгы (AUEC). Натыйжалар мурунку протеомиканын ачылыштары менен салыштырылган
  (SOMAscan Assay v4.1, SomaLogic) Пирсондун корреляциясын колдонуу. Анализдер R (версия 4.1.2) менен жүргүзүлгөн.
• Натыйжалар: Базалык плазмадагы IP-10дун орточо концентрациясыampлес 20.8 пг/мл болгон. Анализдин сезгичтиги 0.064 пг/мл болгон, 4 лог-кабат динамикалык диапазону жана жакшы кайталануу мүмкүнчүлүгү (CV<25%). IFNβ2.9-a жана pegIFNβ-28a продуктулары үчүн 4.9E-30 жана 1E-1 F-тесттин р-маанилери байкалган. 0.33 күндө, IP-10, тиешелүүлүгүнө жараша, IFNβ38-a жана pegIFNβ-28a үчүн базалык көрсөткүчтөн 1 эсе жана 1 эсеге өсүү менен максималдуу жооп көрсөттү. IFNβ-1a (t-тест p=1.04E-04) жана pegIFNβ-1a (p=8.6E-04) үчүн AUECs үчүн плацебого салыштырмалуу күчтүү айырма байкалды. Убакыттын өтүшү менен эки продукт үчүн IP-10 жооп үлгүсү ошол эле плазманын мурунку протеомикалык анализине шайкеш келген.amples (rho=0.87, p=3.9E-122).
• Жыйынтык: Натыйжалар IP-10 анализи сезгич жана кайталануучу ыкма экенин жана андан ары техникалык жактан дени сак субъекттерде IFNβ10-a продуктулары үчүн потенциалдуу фармакодинамикалык биомаркер катары IP-1ду колдогон мурунку табылгаларды кайталайт. Бул анализ келечектеги узунунан жасалган изилдөөлөрдө биосимилярдуулукту баалоо үчүн талапкер PD биомаркери катары плазмада IP-10ду аныктоо үчүн потенциалдуу пайдалуу.

Introduction

• Фармакодинамикалык (PD) биомаркерлер эффективдүүлүктүн акыркы чекиттери менен салыштырма клиникалык изилдөөлөрдү талап кылбастан, биосимилярдык клиникалык өнүгүү программаларын колдоо үчүн колдонулушу мүмкүн.
• Интерферон-бета-1а (INFβ-1a) жана pegylated-IFNβ-1a (pegIFNβ-1a) склерозду дарылоо үчүн бекитилген биологиялык дарылар жана татаал фармакологияга жана чектелген PD биомаркерлерине ээ.
• Плазма протеомикасын колдонуп, биз жакында интерферон-гамма-индукциялануучу протеин-10 (IP-10) INFβ-1a жана pegINFβ-1a потенциалдуу плазма PD биомаркери катары аныктадык.
• Бул изилдөөдө биздин максат ПД катары колдонула турган IP-10 потенциалына жетүү үчүн убакыттын өтүшү менен плазмадагы эки дарыга тең плазмадагы IP-10 реакциясын техникалык кайталоо үчүн сандык иммуно-полимераздык чынжыр реакциясы (iPCR) ыкмасын баалоо болгон. жогоруда аталган дарылар үчүн биомаркер.

Материалдар жана методдор

Плазма сamples FDA (АКШнын Азык-түлүк жана дары-дармек башкармалыгы) тарабынан жүргүзүлгөн бир дозалуу, рандомизацияланган, плацебо көзөмөлүндөгү клиникалык изилдөөдөн чогултулган. Плазмадагы IP-10 деңгээли өндүрүүчүнүн көрсөтмөлөрүнө ылайык Human IP-10 ProQuantum Immunoassay (Thermofisher Scientific)4 аркылуу өлчөнгөн. Концентрациялар стандарттуу ийри талдоодон экстраполяцияланган. Дифференциалдык туюнтуу үчүн биз сызыктуу аралаш эффект моделдеринде ANOVA жүргүздүк. Дары-убакыт өз ара аракеттенүү үчүн F-тест р-баалы <0.05 маанилүү деп эсептелген. Студенттик t-тест дары менен плацебонун AUEC (эффекттеги ийри сызык) ортосунда өткөрүлдү. Proquantum анализинин натыйжалары менен мурунку протеомиканын жыйынтыктарын (SOMAscan® Assay v4.1, SomaLogic)5 салыштыруу Пирсондун корреляциясын колдонуу менен жүргүзүлгөн. Анализдер R (версия 4.1.2) менен жүргүзүлгөн.

Рандомизацияланган, бир дозалык клиникалык изилдөө (NCT04183491)3 36 дени сак субъект

Жоопкерчиликтен баш тартуу: Бул презентациядагы тыянактар ​​жана корутундулар чагылдырат views авторлордун жана FDAнын өкүлү деп чечмеленбеши керек viewлар же саясаттар. Коммерциялык продуктылар, алардын булактары же бул жерде билдирилген материалга байланыштуу колдонулушу Саламаттыкты сактоо жана калкты тейлөө департаменти тарабынан мындай өнүмдөрдү иш жүзүндө же кыйыр түрдө ырастоо катары каралбашы керек.

Макаланын толук текстине кирүү үчүн сканерлеңиз

Жыйынтыктар жана талкуу

• IP-10 баштапкы плазмада көп болгон (медиана = 20.8 пг/мл).amples.
• Анализдин сезгичтиги 0.064 пг/мл болгон, 4 лог-кабат динамикалык диапазону жана жакшы кайталануу мүмкүнчүлүгү (CV<25%).
• IFNβ1-a жана pegIFNβ-1a продуктулары, убакыттын өтүшү менен плазмадагы IP10 деңгээлине олуттуу таасирин тийгизген (Lmer, F-тест p-маанилери тиешелүүлүгүнө жараша 2.9E-28 жана 4.9E-30).
• IP-10 деъгээлинде максималдуу жооп 0.33 күндө байкалган, тиешелүүлүгүнө жараша IFNβ38-a жана pegIFNβ-28a үчүн баштапкы деңгээлден 1 эсеге жана 1 эсеге жогорулаган. AUEC плацебо менен салыштырганда IFNβ-10a (t-тест p = 1E-1.04) жана pegIFNβ-04a (p = 1E-8.6) үчүн IP-04 үчүн кыйла айырмаланган.
• Эки ыкманын ортосунда күчтүү корреляция байкалды (Пирсон корреляциясы, rho=0.87, p=3.9E-122).
• Бул анализ IFNβ10-a өнүмдөрү үчүн био окшоштукка талапкер PD биомаркери катары плазмада IP-1ду келечекте узунунан аныктоодо потенциалдуу пайдалуу.

ProQuantum IP-10 жооп ийри сызыгы

IP-10 плазмасынын деңгээли изилдөө учурунда INFß-1a биологиялык дарылары тарабынан да олуттуу таасир эткен.

Ыраазычылык

Колдонмо жөнгө салуучу илим Omics командасынын бөлүмү, Клиникалык Pharmacology башкаруу бюросу, Биосимилярдык жетекчилик & PD биомаркер жумушчу топтор.
Бул долбоор, жарым-жартылай, ORISE тарабынан башкарылуучу CDERдеги ORISE изилдөөлөрүнүн катышуу программасына дайындалуу менен колдоого алынган, АКШнын DoE менен АКШнын FDA ортосундагы ведомстволор аралык келишим аркылуу.

Proteomic IP-10 жообу ProQuantum аркылуу репликацияланган

Эки ыкманын же технологиянын ортосунда күчтүү корреляция да байкалды:
Пирсондун r мааниси = 0.87
p-маани = 3.93E-122
Сүрөт 3. ProQuantum IP-10 жооп үлгүсү мурунку протеомикалык натыйжаны кайталайт.

Корутунду

• IP-10 сандык iPCR анализи плазмада IP-10ду аныктоо үчүн сезгич жана кайталануучу жогорку өткөрүү ыкмасы болуп саналат.
• Натыйжалар IFNβ10-a продуктулары үчүн потенциалдуу PD биомаркери катары IP-1ду колдогон мурунку протеомикалык ачылыштарды техникалык жактан кайталайт.
• Бул анализ IFNβ10-a өнүмдөрү үчүн био окшоштукка талапкер PD биомаркери катары плазмада IP-1ду келечекте узунунан аныктоодо потенциалдуу пайдалуу.

Шилтемелер

1. Ли Дж, Флориан Дж, СampBell E, Schrieber SJ, Bai JPF, Weaver JL, ж.б. Клиникалык фармакология изилдөөлөрүндө фармакодинамикалык биомаркерлерди колдонуу менен биосимилярдык өнүгүүнү өркүндөтүү. Clin Pharmacol Ther. 2020;107(1):40-2.
2. АКШнын Азык-түлүк жана дары-дармек башкармалыгы. FDA көрсөтмөсү: Клиникалык фармакология маалыматтары шилтеме продуктунун био окшоштугун көрсөтүү үчүн. 2016. Колдонулган 1-май 2022.
3. https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT04183491?term=IFNB+1a&draw=2&rank=7
4. Бурдон, Дэвид М., жана башкалар. ProQuantum immunoassay платформасы адамдын жана чычкандын плазмасындагы цитокиндерди төмөнкү деңгээлде өлчөө үчүн жөнөкөйлөштүрүлгөн иш процессинде жогорку натыйжалуулукту сунуштайт. (2018): 174-39.
5. https://mohanlab.bme.uh.edu/wp-content/uploads/2017/02/SSM-002-Rev-4-SOMAscan-Technical-White-Paper.pdf

Документтер / Ресурстар

FDA Сандык Иммуно ПТР аныктоо [pdf] Instruction Manual Сандык иммуно ПТР аныктоо, Иммуно ПТР аныктоо, ПТР аныктоо, аныктоо

Шилтемелер

• User Manual